Комплект геномна ДНК за магнитна тъкан от животински тъкани

A-1 Ниска концентрация на клетки или вирус в изходната проба-Обогатете концентрацията на клетки или вируси.

А-2 Недостатъчен лизис на пробите-Пробите не са смесени добре с лизисния буфер. Препоръчва се да се разбърква старателно чрез импулсно вихрене 1-2 пъти. - Недостатъчен клетъчен лизис, причинен от намаляването на активността на протеиназа К. - Недостатъчен клетъчен лизис или разграждане на протеини поради недостатъчно време за топла баня. Препоръчва се тъканта да се нарязва на малки парченца и да се удължи времето за къпане, за да се отстранят всички остатъци в лизата.

А-3 Недостатъчна адсорбция на ДНК. —Не е добавен етанол или нископроцентен вместо 100% етанол, преди лизатът да бъде прехвърлен в центрофугиращата колона.

А-4 Стойността на рН на елуиращия буфер е твърде ниска. -Регулирайте рН между 8,0-8,3.

Остатъчен етанол в елуента.

—В елуента има остатъчен промивен буфер PW. Етанолът може да бъде отстранен чрез центрофугиране на центрофугиращата колона за 3-5 минути и след това поставяне при стайна температура или 50 ℃ инкубатор за 1-2 минути.

A-1 Пробата не е прясна. - Извадете положителна ДНК проба като контрола, за да определите дали ДНК в пробата се е разградила.

А-2 Неправилно предварително третиране. - Причинени от прекомерно смилане на течен азот, възстановяване на влагата или твърде голямо количество проба.

Предварителните обработки трябва да варират за различните проби. За растителни проби не забравяйте да ги смилате добре в течен азот. За животински проби хомогенирайте или смилайте добре в течен азот. За проби с клетъчни стени, които е трудно да се счупят, като G+ бактерии и дрожди, се препоръчва използването на лизозим, литиказа или механични методи за разрушаване на клетъчните стени.

4992201/4992202 Комплект за растителна геномна ДНК приема метод, базиран на колона, който изисква хлороформ за екстракцията. Той е особено подходящ за различни растителни проби, както и за сух прах от растения. Комплектът Hi-DNAsecure Plant също е на колонна основа, но не се нуждае от екстракция на фенол/хлороформ, което го прави безопасен и нетоксичен. Подходящ е за растения с високо съдържание на полизахариди и полифеноли. 4992709/4992710 DNAquick Plant System приема метод на течна основа. Извличането на фенол/хлороформ също не е необходимо. Процедурата за пречистване е проста и бърза, без ограничение за началните количества на пробата, така че потребителите могат да регулират гъвкаво количеството според експерименталните изисквания. Голям размер на gDNA фрагменти могат да бъдат получени с висок добив.

Геномната ДНК се извлича от различни обеми проби от пълна човешка кръв чрез TIANamp Blood DNA Kit. Резултатите са както следва. Резултатите са посочени само като справка, действителните резултати от екстракцията зависят от условията на пробите.

Екстракцията на ДНК на кръвен съсирек може да се извърши с помощта на реагентите, предоставени в тези два комплекта, като просто промените протокола към специфичната инструкция за извличане на ДНК на кръвния съсирек. Мекото копие на протокола за извличане на ДНК от кръвен съсирек може да бъде издадено при поискване.

Суспендирайте прясната проба с 1 ml PBS, нормален физиологичен разтвор или TE буфер. Напълно хомогенизирайте пробата чрез хомогенизатор и утайката се събира на дъното на епруветка чрез центрофугиране. Изхвърлете супернатантата и ресуспендирайте утайката с 200 μl буфер GA. Следното пречистване на ДНК може да се извърши съгласно инструкцията.

За пречистване на gDNA в проби от плазма, серум и телесни течности се препоръчва TIANamp Micro DNA Kit. За пречистване на вирусна gDNA от серумни/плазмени проби се препоръчва TIANamp Virus DNA/RNA Kit. За пречистване на бактериална gDNA от серумни и плазмени проби се препоръчва TIANamp Bacteria DNA Kit (лизозимът трябва да бъде включен за положителна бактерия). За проби от слюнка се препоръчва Hi-Swab DNA Kit и TIANamp Bacteria DNA Kit.

DNAsecure Plant Kit или DNAquick Plant System се препоръчват за извличане на геном на гъбички. За извличане на геном на дрожди се препоръчва TIANamp ДНК комплект от дрожди (литиказата трябва да се приготви самостоятелно).