RNAprep Pure Hi-Blood Kit

А-1 Клетъчен лизис или хомогенизация не са достатъчни

---- Намалете използването на проби, увеличете количеството на лизисния буфер, увеличете хомогенизацията и времето за лизис.

A-2 Количеството на пробата е твърде голямо

---- Намалете количеството използвана проба или увеличете количеството на лизисния буфер.

А-1 Недостатъчен клетъчен лизис или хомогенизация

---- Намалете използването на проби, увеличете количеството на лизисния буфер, увеличете хомогенизацията и времето за лизис.

A-2 Количеството на пробата е твърде голямо

---- Моля, вижте максималния капацитет за обработка.

А-3 РНК не се елуира напълно от колоната

---- След добавяне на вода без РНКаза, оставете я за няколко минути преди центрофугиране.

А-4 Етанол в елуента

---- След изплакване, центрофугирайте отново и отстранете измиващия буфер колкото е възможно повече.

А-5 Клетъчната хранителна среда не се отстранява напълно

---- Когато събирате клетки, моля, не забравяйте да премахнете хранителната среда колкото е възможно повече.

А-6 Клетките, съхранявани в RNAstore, не се центрофугират ефективно

---- плътността на RNAstore е по-голяма от средната среда за клетъчна култура; така че центробежната сила трябва да се увеличи. Препоръчва се центрофугиране при 3000x g.

A-7 Ниско съдържание на РНК и изобилие в пробата

---- Използвайте положителна проба, за да определите дали ниският добив е причинен от пробата.

A-1 Материалът не е свеж

---- Пресните тъкани трябва незабавно да се съхраняват в течен азот или веднага да се поставят в реагента RNAstore, за да се осигури екстракционният ефект.

A-2 Количеството на пробата е твърде голямо

---- Намалете количеството проба.

Замърсяване с А-3 РНКазаn

---- Въпреки че буферът, предоставен в комплекта, не съдържа RNase, е лесно да се замърси RNase по време на процеса на екстракция и с него трябва да се работи внимателно.

А-4 Замърсяване с електрофореза

---- Сменете буфера за електрофореза и се уверете, че консумативите и зареждащият буфер не са замърсени с РНКаза.

А-5 Твърде много натоварване за електрофореза

---- Намалете количеството зареждане на пробата, натоварването на всяка ямка не трябва да надвишава 2 μg.

A-1 Количеството на пробата е твърде голямо

---- Намалете количеството проба.

А-2 Някои проби имат високо съдържание на ДНК и могат да бъдат третирани с ДНКаза.

---- Извършете третиране с ДНКаза без РНКаза към получения разтвор на РНК и РНК може директно да се използва за последващи експерименти след третиране или може да бъде допълнително пречистена чрез комплекти за пречистване на РНК.

За стъклени съдове, изпечени при 150 ° C в продължение на 4 часа. За пластмасови контейнери, потопени в 0,5 М NaOH за 10 минути, след това старателно се изплакват с вода без РНКаза и след това се стерилизират, за да се отстрани напълно РНКазата. Реактивите или разтворите, използвани в експеримента, особено водата, трябва да бъдат свободни от РНКаза. Използвайте вода без РНКаза за всички препарати с реагенти (добавете вода към чиста стъклена бутилка, добавете DEPC до крайна концентрация от 0,1% (V/V), разклатете през нощта и автоклавирайте).