2 × GC-богат PCR микс

Hi-fidelity PCR MasterMix за шаблони с високо съдържание на GC.

Този продукт е 2 × MasterMix, съдържащ Taq Plus ДНК полимераза, dNTPs, MgCl2, реакционен буфер, PCR подобрител, оптимизатор и стабилизатор. Той има предимствата на бърза скорост на усилване, простота, висока чувствителност, силна специфичност, добра стабилност и други подобни и може да намали грешките при работа в най -голяма степен. Подходящ е за PCR реакции с висока точност и амплификация на шаблони със сложни структури, като високо съдържание на GC и вторична структура. Той може ефективно да усилва до 20 kb фрагменти с прости шаблони и до 10 kb фрагменти със сложни шаблони.

Котка Не Размер на опаковката
4992794 500 μl
4992795 500 μl

Подробности за продукта

ЧЗВ

Етикети на продукти

Характеристика

■ Високоефективно усилване на целеви фрагменти с високо съдържание на GC: Оптимизираната буферна система и уникалната формула са полезни за стопяването на шаблони с високо съдържание на GC, увеличавайки максимално ефективността на усилване на полимеразата (GC%: 60%-75%).
■ Той е много ефективен за сложни шаблони и шаблони с вторични структури.
■ Висока вярност: Полимеразата с висока вярност е възприета в PCR MasterMix, за да се гарантира точността на амплификацията.
■ Високоефективната, супер здрава и стабилна система за предварително смесване може да сведе до минимум грешките при работа.

Всички продукти могат да бъдат персонализирани за ODM/OEM. За детайли,моля, щракнете върху Персонализирана услуга (ODM/OEM)


  • Предишна:
  • Следващия:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    В: Няма ленти за усилване

    Шаблон А-1

    ■ Шаблонът съдържа белтъчни примеси или Taq инхибитори и т.н. —— Почистете ДНК матрицата, отстранете протеиновите примеси или извлечете матричната ДНК с комплекти за пречистване.

    ■ Денатурацията на шаблона не е завършена —— Увеличете подходящо температурата на денатурация и удължете времето за денатурация.

    ■ Разграждане на шаблона —— Подгответе отново шаблона.

    А-2 грунд

    ■ Лошо качество на грундовете-повторно синтезирайте грунда.

    ■ Разграждане на праймера - Аликвотирайте грундовете с висока концентрация в малък обем за консервиране. Избягвайте многократно замразяване и размразяване или дългосрочно криоконсервиране при 4 ° C.

    ■ Неправилен дизайн на грундове (напр. Дължината на грунда не е достатъчна, димер, образуван между грундовете и т.н.)

    А-3 Mg2+концентрация

    ■ Mg2+ концентрацията е твърде ниска —— Правилно увеличете Mg2+ концентрация: Оптимизирайте Mg2+ концентрация чрез серия от реакции от 1 тМ до 3 тМ с интервал от 0,5 тМ за определяне на оптималния Mg2+ концентрация за всеки шаблон и грунд.

    A-4 Температура на отгряване

    ■ Високата температура на отгряване влияе върху свързването на грунд и шаблон. —— Намалете температурата на отгряване и оптимизирайте състоянието с градиент от 2 ° C.

    A-5 Време за удължаване

    ■ Кратко време за удължаване —— Увеличете времето за удължаване.

    В: Фалшиво положителен

    Феномени: Отрицателните проби също показват лентите на целевата последователност.

    А-1 Замърсяване с PCR

    ■ Кръстосано замърсяване на целевата последователност или продуктите за амплификация - Внимателно да не се пипетира пробата, съдържаща мишена последователност в отрицателната проба, или да се излее от епруветката за центрофуга. Реагентите или оборудването трябва да бъдат автоклавирани, за да се елиминират съществуващите нуклеинови киселини, а наличието на замърсяване трябва да се определи чрез експерименти с отрицателен контрол.

    ■ Замърсяване с реагенти —— Разпределете реактивите в аликвоти и съхранявайте при ниска температура.

    A-2 Primer

    ■ Mg2+ концентрацията е твърде ниска —— Правилно увеличете Mg2+ концентрация: Оптимизирайте Mg2+ концентрация чрез серия от реакции от 1 тМ до 3 тМ с интервал от 0,5 тМ за определяне на оптималния Mg2+ концентрация за всеки шаблон и грунд.

    ■ Неправилен дизайн на праймера и целевата последователност има хомология с нецелевата последователност. —— Грундове за повторно проектиране.

    В: Неспецифично усилване

    Явления: PCR амплификационните ленти са несъвместими с очаквания размер, голям или малък, или понякога се появяват както специфични амплификационни ленти, така и неспецифични амплификационни ленти.

    Грунд А-1

    ■ Лоша специфичност на грунда

    —— Грунд за повторно проектиране.

    ■ Концентрацията на грунда е твърде висока —— Правилно увеличете температурата на денатурация и удължете времето за денатурация.

    А-2 мг2+ концентрация

    ■ Mg2+ концентрацията е твърде висока —— Правилно намалете концентрацията на Mg2+: Оптимизирайте Mg2+ концентрация чрез серия от реакции от 1 тМ до 3 тМ с интервал от 0,5 тМ за определяне на оптималния Mg2+ концентрация за всеки шаблон и грунд.

    А-3 Термостабилна полимераза

    ■ Прекомерно количество ензими —— Намалете подходящо количеството ензими на интервали от 0,5 U.

    A-4 Температура на отгряване

    ■ Температурата на отгряване е твърде ниска-—Подходящо увеличете температурата на отгряване или приемете двустепенния метод на отгряване

    А-5 PCR цикли

    ■ Твърде много PCR цикли —— Намалете броя на PCR циклите.

    В: Пъпчиви или размазани ленти

    Грунд А-1—— Лоша специфичност —— Препроектирайте грунда, променете позицията и дължината на грунда, за да подобрите неговата специфичност; или извършете вложен PCR.

    А-2 шаблонна ДНК

    —— Шаблонът не е чист —— Почистете шаблона или извлечете ДНК с комплекти за пречистване.

    А-3 Mg2+ концентрация

    ——Мг2+ Концентрацията е твърде висока - Правилно намалете Mg2+ концентрация: Оптимизирайте Mg2+ концентрация чрез серия от реакции от 1 тМ до 3 тМ с интервал от 0,5 тМ за определяне на оптималния Mg2+ концентрация за всеки шаблон и грунд.

    A-4 dNTP

    —— Концентрацията на dNTPs е твърде висока —— Намалете подходящо концентрацията на dNTP

    A-5 Температура на отгряване

    —— Твърде ниска температура на отгряване ——Подходящо повишаване на температурата на отгряване

    А-6 цикли

    —— Твърде много цикли ——Оптимизирайте номера на цикъла

    В: Колко матрична ДНК трябва да се добави в 50 μl PCR реакционна система?
    ytry
    В: Как да усилим дългите фрагменти?

    Първата стъпка е да изберете подходящата полимераза. Редовната Taq полимераза не може да се коригира поради липса на 3'-5 'екзонуклеазна активност, а несъответствието значително ще намали ефективността на удължаване на фрагментите. Следователно, обикновената Taq полимераза не може ефективно да усили целевите фрагменти, по -големи от 5 kb. Taq полимераза със специална модификация или друга висококачествена полимераза трябва да бъде избрана, за да се подобри ефективността на удължаване и да се отговори на нуждите от амплификация с дълги фрагменти. В допълнение, усилването на дълги фрагменти също изисква съответно регулиране на дизайна на грунда, времето за денатурация, времето за удължаване, рН на буфера и т.н. Обикновено грундовете с 18-24 bp могат да доведат до по-добър добив. За да се предотврати повреда на шаблона, времето за денатурация при 94 ° C трябва да бъде намалено до 30 секунди или по -малко на цикъл, а времето за повишаване на температурата до 94 ° C преди усилване трябва да бъде по -малко от 1 мин. Нещо повече, настройването на температурата на удължаване на около 68 ° C и проектирането на времето за удължаване според скоростта от 1 kb/min може да осигури ефективно усилване на дълги фрагменти.

    В: Как да подобрим амплификационната вярност на PCR?

    Степента на грешка при PCR амплификация може да бъде намалена чрез използване на различни ДНК полимерази с висока точност. Сред всички открити досега Taq ДНК полимерази, Pfu ензимът има най -ниската грешка и най -високата вярност (виж приложената таблица). В допълнение към подбора на ензими, изследователите могат допълнително да намалят скоростта на PCR мутация чрез оптимизиране на реакционните условия, включително оптимизиране на състава на буфера, концентрацията на термостабилна полимераза и оптимизиране на броя на PCR цикъла.

    Напишете съобщението си тук и ни го изпратете